常見的色譜法主要有:柱色譜法、薄層色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜法、超臨界流體色譜法。
(1)柱色譜法:最原始的色譜方法,該方法將固定相注入下端塞有棉花或?yàn)V紙的玻璃管中,將被樣品飽和的固定相粉末攤鋪在玻璃管頂端,以流動(dòng)相洗脫。常見的洗脫方式有兩種:一種是自上而下依靠溶劑本身的重力洗脫,另一種:自下而上依靠毛細(xì)作用洗脫。收集分離后的純凈組分也有兩種不同的方法:一種方法是在柱尾直接接受流出的溶液,另一種方法是烘干固定相后用機(jī)械方法分開各個(gè)色帶,以合適的溶劑浸泡固定相提取組分分子。柱色譜法被廣泛應(yīng)用于混合物的分離,包括:對(duì)有機(jī)合成產(chǎn)物、天然提取物以及生物大分子的分離。
(2)薄層色譜法:應(yīng)用非常廣泛的色譜方法,這種色譜方法將固定相涂布在金屬或玻璃薄板上形成薄層,用毛細(xì)管、鋼筆或者其他工具將樣品點(diǎn)于薄板一端,之后將點(diǎn)樣端浸入流動(dòng)相中,依靠毛細(xì)作用令流動(dòng)相溶劑沿薄板上行展開樣品。薄層色譜法成本低廉、操作簡(jiǎn)單,被用于對(duì)樣品的粗測(cè)、對(duì)有機(jī)合成反應(yīng)進(jìn)程的檢測(cè)等用途。
(3)高效液相色譜法(HPLC):目前,應(yīng)用最多的色譜分析方法,高效液相色譜系統(tǒng)由流動(dòng)相儲(chǔ)液瓶、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器和記錄器組成,其整體組成類似于氣相色譜,但是,針對(duì)其流動(dòng)相為液體的特點(diǎn)作出很多調(diào)整。HPLC輸液泵要求輸液量穩(wěn)定平衡;進(jìn)樣系統(tǒng)要求進(jìn)樣便利、切換嚴(yán)密;由于液體流動(dòng)相黏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于氣體,為了減低柱壓,高效液相色譜的色譜柱一般比較粗,長(zhǎng)度也遠(yuǎn)小于氣相色譜柱。HPLC應(yīng)用非常廣泛,幾乎遍及定量定性分析的各個(gè)領(lǐng)域。高效液相色譜法依據(jù)溶質(zhì)(樣品)在固定相和流動(dòng)相中分離過(guò)程的物理化學(xué)原理可以分為以下幾種:① 吸附色譜:用固定吸附劑做固定相,以不同極性溶劑做流動(dòng)相,依據(jù)樣品中各組分在吸附劑上吸附性能的差別來(lái)實(shí)現(xiàn)分離。② 分配色譜③ 親水作用色譜④ 疏水作用色譜⑤ 離子色譜⑥ 體積排阻色譜⑦ 親和色譜。
(4)氣相色譜法
(5)超臨界流體色譜