HPLC是上世紀(jì)六七十年代發(fā)展起來(lái)的新型分離分析技術(shù)，廣泛應(yīng)用在制藥、化工、環(huán)境、食品等領(lǐng)域，各行業(yè)實(shí)驗(yàn)室均能看到大量HPLC身影。

HPLC系統(tǒng)由脫氣機(jī)（內(nèi)置、外置）、泵、自動(dòng)（手動(dòng)）進(jìn)樣器、柱溫箱（選配）、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等模塊構(gòu)成。

HPLC管理篇

1、人員的培訓(xùn)與管理

參與實(shí)驗(yàn)室管理的人員應(yīng)對(duì)儀器足夠了解，如有條件應(yīng)參加廠商的高階培訓(xùn)，熟練使用與維護(hù)儀器。凡申請(qǐng)使用儀器的人員應(yīng)接受相關(guān)培訓(xùn)，對(duì)學(xué)過(guò)《儀器分析》課程的申用人可著重講解使用中應(yīng)注意的問(wèn)題，對(duì)于未學(xué)過(guò)《儀器分析》課程的申用人可先在教學(xué)平臺(tái)中學(xué)習(xí)相關(guān)課程，并接受強(qiáng)化培訓(xùn)后方可使用儀器，避免不熟悉儀器直接使用對(duì)儀器造成不可修復(fù)的破壞。

2、機(jī)器的管理

針對(duì)每臺(tái)儀器建立檔案及標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP，每臺(tái)HPLC檔案需包括：品牌、產(chǎn)地、主體流路材質(zhì)（兼容溶劑）、耐壓范圍、正相系統(tǒng)或反相系統(tǒng)（主要看泵密封圈材質(zhì)）、客服電話、對(duì)應(yīng)維修工程師及應(yīng)用工程師的聯(lián)系方式。保證出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)快速聯(lián)系獲取解決方案，將儀器的損害盡可能的降低。

HPLC主體流路材質(zhì)一般有不銹鋼SST、鈦Ti或MP35N（MP35N合金是一種無(wú)磁的鎳鈷鉻鉬合金），普通液相系統(tǒng)無(wú)特殊說(shuō)明一般為不銹鋼系統(tǒng)，鈦或MP35N多用于BioHPLC系統(tǒng)中，比不銹鋼系統(tǒng)更耐腐蝕，和更好的生物兼容性。

針對(duì)每臺(tái)儀器編寫(xiě)完整的操作規(guī)程，應(yīng)涉及到電壓、開(kāi)關(guān)機(jī)順序及注意事項(xiàng)，使用人在申用儀器時(shí)應(yīng)注意儀器的情況，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題及時(shí)記錄并上報(bào)。對(duì)儀器的使用和維護(hù)記錄嚴(yán)格審核。

3、物料管理

所有進(jìn)入液相色譜系統(tǒng)的溶劑均應(yīng)是色譜純，樣品應(yīng)經(jīng)過(guò)相應(yīng)的前處理，確保樣品的潔凈度，不會(huì)堵塞和污染系統(tǒng)。使用的進(jìn)樣小瓶規(guī)格要與自動(dòng)進(jìn)樣器匹配，瓶子隔墊要與樣品溶劑兼容。如需過(guò)濾，應(yīng)選擇與溶劑兼容的濾膜材質(zhì)，避免濾膜溶脹或反應(yīng)等結(jié)果導(dǎo)致樣品污染或系統(tǒng)堵塞等問(wèn)題。

4、相關(guān)規(guī)定

（1）儀器申用的規(guī)范化預(yù)約：有電子平臺(tái)在電子平臺(tái)上申請(qǐng)預(yù)約，沒(méi)電子平臺(tái)可制定手工或電子臺(tái)賬記錄具體情況。（2）制定并嚴(yán)格執(zhí)行實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)定。（3）嚴(yán)格按照儀器SOP規(guī)定使用。（4）完善使用記錄的書(shū)寫(xiě)，執(zhí)行復(fù)核審查。（5）儀器的維護(hù)規(guī)程的制定與執(zhí)行。

5、環(huán)境要求

儀器使用環(huán)境應(yīng)無(wú)塵，通風(fēng)良好，溫度保持在（15-30）℃，室內(nèi)相對(duì)濕度應(yīng)在5%-85%范圍內(nèi)，儀器應(yīng)平穩(wěn)的放在試驗(yàn)臺(tái)上，周?chē)鸁o(wú)強(qiáng)烈機(jī)械振動(dòng)和電磁干擾源。電壓應(yīng)符合響應(yīng)廠商的安裝使用要求。

HPLC維護(hù)篇

目前各廠商生產(chǎn)制造的液相色譜儀主要分兩類(lèi)，一類(lèi)是一體機(jī)，另一類(lèi)是模塊化分體機(jī)。一體機(jī)體積小巧、安裝、移機(jī)便捷；分體機(jī)維修方便，各有優(yōu)勢(shì)。對(duì)于這兩類(lèi)液相系統(tǒng)總體維護(hù)是相似的。

1、脫氣機(jī)的維護(hù)

為避免脫氣機(jī)污染，應(yīng)嚴(yán)格過(guò)濾并定期更新溶劑，定期潤(rùn)洗脫氣機(jī)溶劑通道，對(duì)于走水相的通道這點(diǎn)非常重要。使用有機(jī)溶劑充分的潤(rùn)洗所有通道（使用干凈的溶劑瓶），在使用水和乙腈或甲醇作為流動(dòng)相時(shí)每周充分潤(rùn)洗脫氣機(jī)通道一次。然而在色譜中反復(fù)出現(xiàn)鬼峰時(shí)，應(yīng)及時(shí)調(diào)整潤(rùn)洗周期，并按下面的步驟進(jìn)行相應(yīng)的潤(rùn)洗。（1）在泵出口安裝背壓管，并調(diào)整壓力至200-300bar。（2）用20%的硝酸在常規(guī)流速下沖洗1小時(shí)（使用新鮮的HPLC級(jí)水）。（3）用HPLC級(jí)水潤(rùn)洗通道知道PH測(cè)試為中性。（4）再用HPLC級(jí)乙腈在常規(guī)流速下潤(rùn)洗2小時(shí)。（5）用干凈的溶劑瓶裝上新配置的流動(dòng)相并與脫氣機(jī)連接。（6）安裝新的溶劑過(guò)濾器。（7）拆除背壓管并重新按照要求連接系統(tǒng)。（8）平衡系統(tǒng)。

有些品牌的液相色譜儀只有反相脫氣包，當(dāng)使用正相系統(tǒng)時(shí)，要求短接脫氣機(jī)。有些品牌亦有正相脫氣包，使用時(shí)應(yīng)注意，避免溶劑對(duì)脫氣包材質(zhì)造成不可逆的損壞。

2、溶劑吸濾頭維護(hù)

室溫較高時(shí)，使用純水相或有機(jī)相比例較低時(shí)，流動(dòng)相應(yīng)臨用現(xiàn)配及時(shí)清洗吸濾頭以防吸濾頭堵塞。

定期檢查溶劑過(guò)濾頭，尤其是水及相似溶劑作為流動(dòng)相時(shí)，細(xì)菌等微生物及其代謝產(chǎn)物容易沉淀堵塞濾頭。所以定期更換溶劑，并在清潔溶劑瓶后重新裝入新的溶劑，必要時(shí)，更換新的溶劑濾頭。

3、泵的維護(hù)

泵的易損件主要為單向閥、過(guò)濾白頭、柱塞桿、柱塞密封圈等，做好泵頭的維護(hù)，反相系統(tǒng)使用緩沖鹽時(shí)應(yīng)使用seal wash清洗，如沒(méi)有自動(dòng)后密封清洗系統(tǒng)，可以手動(dòng)清洗，當(dāng)使用正相系統(tǒng)時(shí)選擇適宜的溶劑清洗。

應(yīng)注意有些品牌的后密封清洗系統(tǒng)的溶劑瓶是循環(huán)的，有些品牌是非循環(huán)利用的，對(duì)于循環(huán)式的后密封清洗系統(tǒng)應(yīng)定期更換儲(chǔ)液瓶中的溶劑，避免溶劑中緩沖鹽濃度過(guò)高起不到清洗的作用，以及溶劑瓶中滋生微生物。對(duì)于非循環(huán)的溶劑瓶除了定期更換溶劑外還應(yīng)注意，不要讓溶劑瓶中的溶劑跑空。

如果要使用了高濃度鹽類(lèi)流動(dòng)相（通常最大不超過(guò)1moL/L），在后密封清洗系統(tǒng)沒(méi)有充分運(yùn)行（大于5min）的情況下，嚴(yán)禁運(yùn)行泵，否則將造成柱塞桿及柱塞密封的損壞。

泵的部件中有peek（聚醚醚酮）材質(zhì)組件，在使用氯仿，四氫呋喃THF，二甲基亞砜DMSO等溶劑時(shí)，peek材質(zhì)的管線或其他部件會(huì)發(fā)生溶脹現(xiàn)象，建議更換耐受以上溶劑的不銹鋼備件或鈦或者M(jìn)P35N等材質(zhì)的備件。

4、Purge閥維修

不要用工具來(lái)擰緊purge閥，過(guò)緊可能會(huì)損壞密封墊，并且必須在系統(tǒng)壓力為0時(shí)的情況打開(kāi)或者關(guān)閉purge閥。

5、在線過(guò)濾器

purge中含有在線過(guò)濾器，當(dāng)系統(tǒng)背壓高時(shí)考慮更換新的在線過(guò)濾器濾芯。有些品牌是主動(dòng)閥或者被動(dòng)閥，需要更換閥中的過(guò)濾白頭。

通常情況下，泵的柱塞密封墊由極高分子量聚乙烯（UHMW-PE）材料制成。當(dāng)使用氯仿、三氯代苯、二氯甲烷、四氫呋喃或甲苯做溶劑時(shí)會(huì)對(duì)UHMW-PE密封墊造成化學(xué)損傷。在使用四氯化碳、二乙醚、乙醚、二異丙醚、酮類(lèi)、甲苯、甲基環(huán)已胺及氯苯時(shí)還可能發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。不同制造商的密封墊材質(zhì)有不同，有些是PTFE材質(zhì)的還有石墨的。

6、自動(dòng)進(jìn)樣器的維護(hù)

不同品牌的自動(dòng)進(jìn)樣器結(jié)構(gòu)有所差異，應(yīng)詳見(jiàn)廠商說(shuō)明書(shū)做好維護(hù)。洗針液應(yīng)定期更換，當(dāng)使用內(nèi)插管進(jìn)樣瓶時(shí)，應(yīng)及時(shí)調(diào)整進(jìn)樣針高度，避免對(duì)硬件造成損傷，當(dāng)出現(xiàn)進(jìn)樣體積重復(fù)性不好的情況時(shí)，排除儀器故障問(wèn)題，由于進(jìn)樣瓶?jī)?nèi)負(fù)壓造成的，對(duì)于高沸點(diǎn)難揮發(fā)的樣品可選用欲開(kāi)口進(jìn)樣隔墊。定期檢查進(jìn)樣針位置，防止進(jìn)樣時(shí)扎偏損壞硬件。

溶劑的選擇：所有不銹鋼、鈦合金、及寶石PCTFE聚三氟氯乙烯、PTFE聚四氟乙烯、peek聚醚醚酮等材質(zhì)制造的部件都長(zhǎng)期浸泡在溶劑中。

必須使用與管道材質(zhì)匹配的標(biāo)準(zhǔn)試劑和緩沖鹽溶液。特別注意類(lèi)似高粘度、低沸點(diǎn)、有紫外吸收（UV-VIS檢測(cè)器）、高折射率（RID檢測(cè)器）及可揮發(fā)溶劑（脫氣機(jī)），高濃度緩沖鹽溶劑，通常最大不超過(guò)1moL/L，使用時(shí)應(yīng)確認(rèn)后密封清洗系統(tǒng)運(yùn)行再正確的清洗溶劑上。

自動(dòng)進(jìn)樣器大致分為兩類(lèi)：不帶溫控的自動(dòng)進(jìn)樣器和帶溫控的自動(dòng)進(jìn)樣器。對(duì)于可進(jìn)行溫控的自動(dòng)進(jìn)樣器要注意及時(shí)清理冷凝水，定期清洗樣品盤(pán)避免進(jìn)樣針堵塞，針座漏液需要更換針座密封，針座堵了可以通過(guò)反沖的方式解決。進(jìn)樣閥如漏液需更換進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)子密封等組件。

7、柱溫箱的維護(hù)

一般沒(méi)有需要特殊維護(hù)的地方。

8、檢測(cè)器的維護(hù)

檢測(cè)器需要維護(hù)的部件主要是燈和流通池。定期檢測(cè)燈能量，必要時(shí)更換燈。當(dāng)結(jié)果譜圖出現(xiàn)異常時(shí)確認(rèn)是否是流通池污染導(dǎo)致的，及時(shí)清洗流通池。

---本文摘自《實(shí)驗(yàn)與分析》