色譜柱是液相色譜儀的核心部件。先將其安裝、啟用和維護(hù)中重點(diǎn)注意事項(xiàng)分享給大家。

1、柱頭類型和不銹鋼毛細(xì)管接頭的匹配。色譜柱是消耗品，不是儀器原配的情況很多。如果接頭和柱頭深度不匹配將會(huì)產(chǎn)生漏液或者死體積過(guò)大的現(xiàn)象。接頭比柱頭深度長(zhǎng)，不易擰緊而漏液；接頭比柱頭深度短，柱頭內(nèi)留有空隙而產(chǎn)生死體積，使譜帶展寬和峰拖尾。

2、溶劑的匹配轉(zhuǎn)換。色譜柱內(nèi)保存溶劑和儀器系統(tǒng)內(nèi)存留溶劑，如果和流動(dòng)相不匹配，使用前需進(jìn)行轉(zhuǎn)換。特別是流動(dòng)相含緩沖鹽時(shí)，如保存溶劑是純有機(jī)相或有機(jī)相比例高，直接將新柱接入使用，會(huì)導(dǎo)致緩沖鹽在柱內(nèi)結(jié)晶析出，最嚴(yán)重會(huì)將新柱永久不可逆地?fù)p壞。正相柱保存溶劑一般為正己烷，如果要轉(zhuǎn)換成HILIC柱模式使用，由于正己烷和甲醇乙腈的互溶性不好，轉(zhuǎn)換中間需用二氯甲烷或乙酸乙酯過(guò)渡。

3、新柱使用前的平衡和老化。廠家出廠檢驗(yàn)時(shí)一般都已進(jìn)行過(guò)平衡，但色譜柱到最終用戶時(shí)間不一，用戶正式測(cè)定前最好對(duì)色譜柱再次平衡。最好的平衡兼老化一起進(jìn)行的方法是運(yùn)行幾次完整的分析程序（包括進(jìn)樣），直到觀察到峰形、保留時(shí)間和峰面積穩(wěn)定為止。所謂“老化”是借用了氣相的術(shù)語(yǔ)，目的是達(dá)到分析物在色譜柱以及整個(gè)液相系統(tǒng)流路中的吸附飽和。對(duì)某些特定的待測(cè)物，如分子量大于1000的，因擴(kuò)散速度慢，老化時(shí)間相應(yīng)要長(zhǎng)，可采取大濃度進(jìn)樣或在同一個(gè)洗脫周期內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣多針的方式加快老化。

4、PH使用范圍。一般認(rèn)為硅膠基質(zhì)柱子的pH使用范圍是2-8，這是很粗略的。硅膠類型、使用溫度、硅膠表面所鍵合的固定相類型以及緩沖鹽的不同，對(duì)此均有影響。硅膠比孔容小、鍵合密度大的填料pH耐受范圍要大一些，有些選用高品質(zhì)硅膠，加上高密度鍵合和雙封尾，或特殊工藝使pH耐受范圍最大提高到10。磷酸鹽緩沖鹽滲透力強(qiáng)，有加快硅膠溶解的副作用，它的存在會(huì)降低pH使用范圍。有機(jī)雜化硅膠以及硅膠表面涂覆雜化層的硅膠填料，有機(jī)質(zhì)的存在使pH使用范圍能到12以上。拿到柱子第一時(shí)間閱讀說(shuō)明書，確認(rèn)色譜柱內(nèi)的封存液，有條件可以依照COA報(bào)告做柱效測(cè)試。

5、色譜柱保存。短期保存(隔夜或隔周末)用所用的流動(dòng)相（不含緩沖鹽）保存為佳，以盡量減少下次使用的平衡時(shí)間。一般只建議在長(zhǎng)期保存反相柱的時(shí)候用純甲醇或乙腈，一方面純有機(jī)相保存有最大限度減少鍵合相水解的作用，但純甲醇（乙腈）又會(huì)將已水解而暫時(shí)吸附在柱內(nèi)的鍵合相洗脫出去，使固定相流失進(jìn)程加快，壽命縮短。純有機(jī)相保存還有易揮發(fā)使柱床變干的缺點(diǎn)，使用80%左右有機(jī)相保存也屬好的選擇，且足以避免長(zhǎng)菌。強(qiáng)烈建議在柱身上貼標(biāo)簽標(biāo)明保存溶劑。

CN基柱在有機(jī)極性溶劑中柱床不穩(wěn)定（會(huì)導(dǎo)致柱床結(jié)構(gòu)坍塌），適合在水相中低溫保存。低溫保存要確保不發(fā)生固定相凍結(jié)而損壞柱床。離子交換柱和水性SEC柱等適合保存在水溶液中的色譜柱，可加0.05%疊氮化鈉溶液防止長(zhǎng)菌。

正相柱，無(wú)論是短期還是長(zhǎng)期，都推薦保存在所用流動(dòng)相中。

上面是基本色譜分離方程式，分離度R和柱效（N）、選擇因子（?）以及容量因子k'相關(guān)，和柱壓無(wú)關(guān)。但柱壓（P）仍不失為 HPLC方法中的最重要參數(shù)之一，因?yàn)橹鶋悍从沉松V柱的內(nèi)部狀況?，F(xiàn)今能承受400 bar壓力的HPLC泵很常見(jiàn)，色譜柱如在遠(yuǎn)低于上限的壓力下正常運(yùn)行，不需要我們重點(diǎn)關(guān)注；當(dāng)柱壓升高接近上限或者柱壓有異常升高，往往意味著色譜柱出狀況了，需及時(shí)進(jìn)行維護(hù)和補(bǔ)救，嚴(yán)重時(shí)色譜柱就已報(bào)廢了。

---本文摘自《實(shí)驗(yàn)與分析》