流動(dòng)相是色譜分析中不可缺少的,它可以是氣體、液體、也可以超臨界流體等。常見(jiàn)的流動(dòng)相主要有:乙腈-水溶液、乙腈-醋酸水溶液、甲醇-水溶液、乙腈-磷酸水溶液等。關(guān)于流動(dòng)相的選擇,這里總結(jié)下,流動(dòng)相的儲(chǔ)存秘訣,以及試劑混合會(huì)導(dǎo)致的一些色譜故障,再以及流動(dòng)相長(zhǎng)霉時(shí)應(yīng)該如果處理的問(wèn)題!
流動(dòng)相的配制要點(diǎn)要記得:1.配制不含水的有機(jī)溶劑類流動(dòng)相所用量筒應(yīng)區(qū)分開(kāi),必須是干燥的,不得有水。2.流動(dòng)相的抽濾。含水流動(dòng)相和不含水流動(dòng)相的抽濾裝置應(yīng)區(qū)分開(kāi)。抽濾不含水的有機(jī)溶劑類流動(dòng)相所用裝置必須是干燥的,不得有水。3.超聲波震蕩,除氣泡。4.使用0.04%的疊氮鈉溶液以防止流動(dòng)相長(zhǎng)菌。
流動(dòng)相的儲(chǔ)存及標(biāo)識(shí):將適量抽濾好的流動(dòng)相倒入流動(dòng)相專用儲(chǔ)液瓶,潤(rùn)洗一次后倒入廢液瓶,再將剩余流動(dòng)相全部倒入專用儲(chǔ)液瓶;填寫(xiě)《流動(dòng)相標(biāo)簽》,并將標(biāo)簽貼在儲(chǔ)液瓶上。更換流動(dòng)相時(shí)應(yīng)及時(shí)更新《流動(dòng)相標(biāo)簽》。流動(dòng)相效期
不可忽略的步驟:1.加鹽流動(dòng)相做完實(shí)驗(yàn)沖洗步驟:先用50%純水和50%有機(jī)相沖洗,然后逐漸將有機(jī)相將低到10%甚至5%,最后用100%有機(jī)相沖洗封柱,整個(gè)過(guò)程1h以上。若是沖洗一晚上,則用5%甲醇以0.1ml/min以下的低流速?zèng)_洗。2.10%異丙醇在線沖洗密封墊:10%異丙醇需定期更換,流動(dòng)相不加鹽時(shí),周期可以設(shè)置1min,沖洗0.2min;流動(dòng)相加鹽時(shí),周期設(shè)置1min,沖洗0.5min,最大為0.7min(長(zhǎng)期處于最大值會(huì)導(dǎo)致蠕動(dòng)泵磨損)。3. 流動(dòng)相更換:流動(dòng)相瓶必須清洗干凈,含水流動(dòng)相需定期更換避免長(zhǎng)菌,純水2天換一次,進(jìn)樣前和實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需不定時(shí)觀察流動(dòng)相有無(wú)沉淀。4. 流動(dòng)相瓶清洗:先用酸液浸泡,然后用大量的自來(lái)水沖洗,接著用蒸餾水涮3次以上,最后一次用哇哈哈水潤(rùn)洗。
關(guān)于流動(dòng)相所用試劑:
溶劑中的雜質(zhì)會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)“鬼峰”,特別是梯度解吸時(shí)。
溶劑混合產(chǎn)生的問(wèn)題:
樣品的溶解:
流動(dòng)相過(guò)濾頭產(chǎn)生的問(wèn)題
緩沖液的使用:使用前必須過(guò)濾; 使用后一定要進(jìn)行清洗 ,以免造成腐蝕、磨損、阻塞:用純水沖洗30-60min(1ml/min),再用甲醇沖洗30min; 易受到細(xì)菌和霉菌的影響。注意:不能直接用有機(jī)溶劑沖洗。
流動(dòng)相脫氣的必要性:
更換流動(dòng)相時(shí)的注意事項(xiàng):更換互溶流動(dòng)相時(shí)注意清洗吸濾頭;更換不互溶流動(dòng)相時(shí)必須用中間過(guò)渡液清洗系統(tǒng),例如異丙醇;更換緩沖液時(shí),應(yīng)用純水過(guò)渡;更換流動(dòng)相后應(yīng)使用PURGE鍵快速排液。排去殘液或氣泡。
注意緩沖液的pH值與使用的色譜柱匹配:緩沖液必須過(guò)濾膜;使用緩沖液期間,用注射器推純水,清洗柱塞桿,延長(zhǎng)泵密封墊壽命;分析完后用純水清洗系統(tǒng)。
自動(dòng)進(jìn)樣器清洗液:如選擇不當(dāng)重現(xiàn)性不好;常用1:1的甲醇水或不含鹽的流動(dòng)相;清洗液必須過(guò)濾,經(jīng)常更換;清洗液需對(duì)樣品有一定的溶解度;不可用乙腈作為自動(dòng)進(jìn)樣器的清洗液。
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