高效液相色譜法的優(yōu)缺點：1.優(yōu)點：分離效率高，選擇性好，檢測靈敏度高，操作自動化，應(yīng)用范圍廣；與氣相色譜法相比具有的優(yōu)點：不受試樣的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性限制，應(yīng)用范圍廣；流動相種類多，可通過流動相的優(yōu)化達到高的分離效率；一般在啊室溫下分析即可，不需高柱溫。2. 缺點：分析成本高，液相色譜儀價格及日常維護費用貴，分析時間一般比氣相長。

操作注意事項：1、色譜柱的柱效和保護柱：拿到一根新柱時，一定要先看其使用說明，然后測柱效，定期檢測柱效，保留在新色譜柱上得到的色譜圖，并記錄條件，定期檢測儀器的譜帶展寬，若應(yīng)用于在線監(jiān)測，應(yīng)對色譜柱提供在線的物理保護和化學保護，例如采取安裝在線過濾器，自裝填料保護柱和預裝保護柱等。在線過濾器的作用是防止顆粒在柱頭累計，優(yōu)點是基本不影響柱效，在需要高柱效的時候常用，常更換的消耗品是濾芯和墊圈。保護柱的作用是防止柱子被化學污染，缺點是多數(shù)保護柱影響色譜柱的柱效，特別是在用微柱時，常用的是普通自裝填料的保護柱。最近新出的一些保護柱例如Sentry-guard保護柱,它的特點是高質(zhì)量、高效填料、增加分析柱效、對臟樣品載荷能力大，能延長保護柱的壽命，手可擰緊接頭，安裝時不需要工具，省時省，可換芯式設(shè)計，能采用各種不同的填料，主要適用于非常臟非常復雜的樣品本底，例如，生化樣品，環(huán)境樣品和食品等，或者不想做太多的固相萃取，不想降低柱效果等情況。2、色譜柱的清洗：對所做的樣品要有充分的了解，用對該樣品洗脫能力最強的流動相清洗，對于硅膠柱，先用甲醇洗去極性雜質(zhì)，然后用干燥的二氯甲烷和正庚烷100-200mL 依次活化，對于鍵和相柱，一般用甲醇-氯仿-甲醇-水依次沖洗， 每種色譜柱有特定的清洗方法， 一定要看其使用說明。3、色譜柱的存放：存放前除去雜質(zhì)和鹽，采用合適的存放溶劑，避免色譜柱床的干枯，避免機械振動，防止細菌生長，注意存放的溫度。

色譜柱的常見故障及排除：1、柱壓過高：可能是微粒堵塞，柱床膨脹，不可逆吸附，細菌生長等造成的。也有可能是系統(tǒng)反壓問題，例如阻尼器堵塞，進樣器堵塞，管路或連接口堵塞，在線過濾器不干凈，壓力傳感器不準確等。2、柱效低：可能是色譜柱被污染、過濾片部分堵塞、色譜柱內(nèi)的死體積造成，例如，流動相pH值或者組成不合適造成固定相損失，流動相急劇變化造成固定相物理損壞，機械振動造成固定相產(chǎn)生裂縫，柱床收縮或干枯。也有可能是儀器連接的問題，認真檢查進樣器、檢測器、管路、保護柱和在線過濾器等是否連接好，也可能是色譜柱沒有平衡好，進樣量過大等問題。3、重復性差、不出峰、回收率低：可能是色譜柱被污染，流動相PH 值或者組成不合適造成固定相損失，樣品溶劑不同或樣品本身不穩(wěn)定，固定相極性過強或者流動相極性過弱，或者發(fā)生非特異性吸附。也可能梯度實驗時平衡時間不足，溫度波動，流動相組成改變，樣品溶劑不同，樣品穩(wěn)定性不好，方法的開發(fā)不好，緩沖液的酸堿度不合適或者緩沖能力不足。

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